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腺病毒包裝

更新時間:2024-09-26

簡要描述:

腺病毒包裝(Adenovirus,Ad)是一種無包膜的線狀雙鏈DNA病毒,其復(fù)制不依賴于宿主細胞的分裂。有近50個血清型,大多數(shù)Ad載體都是基于血清型2和5,通過轉(zhuǎn)基因的方式取代E1和E3基因,降低病毒的復(fù)制能力。這些重組病毒僅在高水平表達E1和E3基因的細胞中復(fù)制,因此是一種適用于治療的高效控制系統(tǒng)。

腺病毒包裝(Adenovirus,Ad)是一種無包膜的線狀雙鏈DNA病毒,其復(fù)制不依賴于宿主細胞的分裂。有近50個血清型,大多數(shù)Ad載體都是基于血清型2和5,通過轉(zhuǎn)基因的方式取代E1和E3基因,降低病毒的復(fù)制能力。這些重組病毒僅在高水平表達E1和E3基因的細胞中復(fù)制,因此是一種適用于治療的高效控制系統(tǒng)。

重組腺病毒(AdV)是人血清5型腺病毒(Ad5),一種復(fù)制缺陷的腺病毒載體系統(tǒng),在基因治療、基礎(chǔ)生命科學(xué)研究等領(lǐng)域被廣泛應(yīng)用。腺病毒缺失了早期表達基因序列E1和E3區(qū)。E1是腺病毒復(fù)制所必須的,E1的缺失使其不能自身復(fù)制,只能依靠包裝細胞如293A細胞提供的反式互補進行復(fù)制擴增,以此保證腺病毒的安全性。

       

腺病毒包裝特點:

1)幾乎可以感染所有類型的細胞。

2)可以獲得復(fù)制缺陷型 (E1 和 E3 缺失) 的腺病毒。

3)病毒滴度高,產(chǎn)生病毒經(jīng)過濃縮后可以達到1012 PFU/mL,能有效的進行增殖。

注:plaque forming unit/ml,空斑形成單位,感染性滴度的單位一般表示為PFU/ml。

4)腺病毒載體感染宿主的范圍比較廣,制備容易,操作簡單。

5)感染細胞時,不整合到染色體中,不存在激活致癌基因或插入突變等危險,生物安全性高。


簡要流程:

1)構(gòu)建表達 siRNA/miRNA 的腺病毒載體。

2)采用 PacI 消化純化的質(zhì)粒。

3)消化好的腺病毒表達載體轉(zhuǎn)染 293A 細胞,收獲細胞以制備病毒粗提液。

4)將病毒粗提液感染293A細胞以擴增病毒。

5)分裝,-80℃保存。


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